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微生物菌種活化方法匯總
點擊次數(shù):29 更新時間:2025-07-08

 微生物菌種活化就是將保藏狀態(tài)的菌種放入適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng),逐級擴大培養(yǎng)是為了得到純而壯的培養(yǎng)物,即獲得活力旺盛的、接種數(shù)量足夠的培養(yǎng)物。菌種發(fā)酵有一般需要2-3代的復壯過程,因為保存時的條件往往和培養(yǎng)時的條件不相同,所以要活化,讓菌種逐漸適應培養(yǎng)環(huán)境。菌種活化是指將長期保存的菌種恢復到具有生長活力的狀態(tài),以便于進一步的培養(yǎng)和使用。根據(jù)菌種的保存方式,活化方法可以分為以下幾種:

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1. 凍干粉或載體保存形式的活化:

  首先,將凍干粉或載體保存的菌株加入少量生理鹽水或非選擇性肉湯培養(yǎng)基中進行溶解懸浮。

  使用劃線或涂布方式接種至平板,或吸取菌液至液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。

 

2. 甘油凍存或液體保存形式的活化:

  在室溫下快速融化,然后進行劃線或涂布接種至平板,或直接加入到液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。

 

3. 瓷珠形式的活化:

  挑取單個瓷珠在平板上滾動數(shù)次或直接加入到液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。

4. 斜面或半固體形式的活化:

  直接挑取菌苔轉(zhuǎn)接至平板或液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。

5. 具體操作步驟:

  準備培養(yǎng)基:根據(jù)菌種類型選擇合適的培養(yǎng)基,如胰酪大豆胨液體/瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯/瓊脂培養(yǎng)基等。

  活化過程:

1) 第一代活化:從凍存管或斜面挑取菌種,接種至固體斜面或液體培養(yǎng)基,在適宜溫度下靜置培養(yǎng)(如細菌37℃, 24小時)。

2) 擴大培養(yǎng):將活化的菌液按1%5%接種量轉(zhuǎn)移至新鮮液體培養(yǎng)基,搖床振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期。

  注意事項:嚴格無菌操作,超凈臺酒精燈旁接種;若菌株生長緩慢,可延長培養(yǎng)時間或添加特定生長因子。

6. 復蘇凍干菌株:

  開啟產(chǎn)品包裝:先用70%酒精棉擦拭外包裝,再打開使用。

  復活:選擇合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進行復活,第1次活化最好在非選擇性瓊脂培養(yǎng)基上進行。

  傳代次數(shù):凍干菌株的傳代次數(shù)不得超過5代。

7. 工作菌株確認:

  1)、使用無菌接種環(huán)在相應的培養(yǎng)基平板上劃線分離單個菌落,置適宜條件下培養(yǎng)。

  2)、觀察菌落狀態(tài),挑取單一純菌落,進行革蘭染色、鏡檢,確認菌種。

通過這些方法,可以有效地活化并復蘇微生物菌種,確保其在后續(xù)實驗中的活力和純度。

 


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