淺述如何辨別熒光定量PCR試劑盒的好壞
點擊次數：794 更新時間：2020-05-21
熒光定量PCR試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測肌肉組織、牛奶等樣品中的地塞米松，試劑盒由預包被偶聯抗原的酶標板、酶標記物、抗體、標準品及其他配套試劑組成。檢測時，加入標準品或樣品溶液，樣本中的地塞米松藥物和酶標板上預包被偶聯抗原競爭抗地塞米松藥物抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含地塞米松藥物含量成負相關，與標準曲線比較即可得出樣本中地塞米松藥物的殘留量。
熒光定量PCR試劑盒可用作ELISA測定的標本十分廣泛，體液、分泌物和排泄物等均可作標本，以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進行測定，有些則需經預處理。大部分ELISA檢測均以血清為標本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。制備血漿標本需借助于抗凝劑，而血清標本只要待血清自然凝固收縮后即可取得。除特殊情況外，在醫(yī)學檢驗中均以血清作為檢測標本。在ELISA中血漿和血清可同等應用。血清標本可按常規(guī)方法采集，應注意避免溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質，以HRP為標記的ELISA測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。
熒光定量PCR試劑盒辨別好壞的方法：
1、可采用已知濃度的重組細胞因子，稀釋到檢測范圍內作為樣本加入，看檢測的準確性。
2、選定一個檢測范圍內的濃度做多孔重復，可看出平行性好不好。即板內CV值的大小，此操作時需要小心加樣的準確性。對一些制作較粗糙的試劑盒來說，板間CV值是較大的。
3、如果有相同指標的熒光定量PCR試劑盒，可用對方的標準品作為樣本，分別加入各自的試劑盒做檢測，以檢測試劑盒的真實性，準確性。如其中一種是的，比較可靠的話，可作為標準來驗證另一試劑盒的準確程度。
4、對用待測指標的重組細胞因子做試劑盒說明書上標定的zui小濃度稀釋，可測出靈敏度，建議5個復孔以上才有意義。一般以20個復孔做出的結果作為檢測限。用此實驗可驗證出所購試劑盒的靈敏度是否如說明書所述，也可判斷出所購試劑盒是否有夸大之說。
